Antibacterial and antifungal capacity of three commercially available mouthwashes with different concentrations of chlorhexidine / Efecto antibacteriano y antifúngico de tres enjuagues bucales comerciales con diferentes concentraciones de clorhexidina

Abstract Chlorhexidine was introduced almost seven decades ago and has a myriad of applications in dentistry. Few studies have evaluated the antimicrobial and antifungal capacity of different concentrations of chlorhexidine mouthwashes. Therefore, the aim of this study, was to evaluate in vitro, the antibacterial and antifungal capacity of three commercially available mouthwashes in Costa Rica, with different concentrations of chlorhexidine, 0.12%, 0.06%, and 0.03%. The experimental method selected was the Kirby-Bauer method to evaluate the antibacterial and antifungal effect of each compound by measuring the inhibitory effect on Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, and Candida albicans strains, exposed to the antiseptic solutions. All samples showed some degree of antibacterial and antifungal effect. Even though we provide in vitro results, our findings are of relevance since all the species used in our experiment are microorganisms that may be present in dental plaque. Our results further support evidence that oral hygiene regimens may include mouthwashes with low doses of chlorhexidine and maintain reasonable antibacterial and antifungal efficacy.

Resumen La clorhexidina se introdujo hace casi siete décadas y tiene una gran variedad de aplicaciones en odontología. Pocos estudios han evaluado la capacidad antimicrobiana y antifúngica de diferentes concentraciones de enjuagues bucales con clorhexidina. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar in vitro, la capacidad antibacteriana y antifúngica de tres enjuagues bucales disponibles comercialmente en Costa Rica, con diferentes concentraciones de clorhexidina, 0.12%, 0.06% y 0.03%. El método experimental seleccionado fue el método Kirby-Bauer para evaluar el efecto antibacteriano y antifúngico de cada compuesto midiendo el efecto inhibidor sobre Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Escherichia coli y Candida albicans, expuestos a la solución antiséptica. Todas las muestras mostraron algún grado de efecto antibacteriano y antifúngico. Aunque proporcionamos resultados in vitro, nuestros hallazgos son de relevancia, ya que todas las especies utilizadas en nuestro experimento son microorganismos que pueden estar presentes en la placa dental. Nuestros resultados respaldan aún más la evidencia de que los regímenes de higiene bucal pueden incluir enjuagues bucales con dosis bajas de clorhexidina y mantener una eficacia antibacteriana y antifúngica razonable.

Development and validation of a microbiological assay for determination of chlorhexidine digluconate in aqueous solution

Chlorhexidine (CHX) is a broad-spectrum antiseptic that is used in many topical pharmaceutical formulations. Because there is no official microbiological assay reported in the literature that is used to quantify CHX, this paper reports the development and validation of a simple, sensitive, accurate and reproducible agar diffusion method for the dosage of chlorhexidine digluconate (CHX-D) in an aqueous solution. The assay is based on the inhibitory effect of CHX-D upon the strain of Staphylococcus aureus ATCC 25923, which is used as the test microorganism. The design 3x3 parallel-line model was used. The results were treated statistically by analysis of variance (ANOVA), and they were excellent in terms of linearity (r = 0.9999), presenting a significant regression between the zone diameter of growth inhibition and the logarithm of the concentration within the range of 0.5 to 4.5%. The results obtained were precise, having relative standard deviations (RSD) for intra-day and inter-day precision of 2.03% and 2.94%, respectively. The accuracy was 99.03%. The method proved to be very useful and appropriate for the microbiological dosage of CHX-D in pharmaceutical formulations; it might also be used for routine drug analysis during quality control in pharmaceutical industries.

Clorexidina (CHX) é um antisséptico com amplo espectro de ação utilizada em muitos tipos de preparações farmacêuticas para uso tópico. Uma vez que não há na literatura ensaio microbiológico oficial para quantificar a clorexidina, este trabalho objetivou o desenvolvimento e validação de um ensaio microbiológico simples, sensível, exato e reprodutível, por difusão em ágar, para doseamento de digliconato de clorexidina (CHX-D) em solução aquosa. O ensaio é baseado no efeito da inibição de Staphylococcus aureus ATCC 25923, utilizado como microorganismo teste, pela CHX-D. Utilizou-se o delineamento 3x3. Os resultados foram verificados estatisticamente pela análise de variância (ANOVA) e apresentaram excelente linearidade (r = 0,9999), demonstrando que o método segue o modelo linear com regressão significativa entre o diâmetro da zona de inibição e o lagaritmo da concentração no intervalo de 0,5 a 4,5%. Os resultados obtidos foram precisos apresentando desvio padrão relativo (DPR) para precisão intra-dia de 2,03% e DPR para precisão inter-dias de 2,94%. A exatidão foi 99,03%. O método provou ser muito útil e apropriado para doseamento microbiológico da CHX-D em formas farmacêuticas e pode ser empregado para análise desta substância no controle de qualidade em indústrias farmacêuticas.

Chlorhexidine: beta-cyclodextrin inhibits yeast growth by extraction of ergosterol

Chlorhexidine (Cx) augmented with beta-cyclodextrin (β-cd) inclusion compounds, termed Cx:β-cd complexes, have been developed for use as antiseptic agents. The aim of this study was to examine the interactions of Cx:β-cd complexes, prepared at different molecular ratios, with sterol and yeast membranes. The Minimal Inhibitory Concentration (MIC) against the yeast Candida albicans (C.a.) was determined for each complex; the MICs were found to range from 0.5 to 2 µg/mL. To confirm the MIC data, quantitative analysis of viable cells was performed using trypan blue staining. Mechanistic characterization of the interactions that the Cx:β-cd complexes have with the yeast membrane and assessment of membrane morphology following exposure to Cx:β-cd complexes were performed using Sterol Quantification Method analysis (SQM) and scanning electron microscopy (SEM). SQM revealed that sterol extraction increased with increasing β-cd concentrations (1.71 × 10³; 1.4 × 10³; 3.45 × 10³, and 3.74 × 10³ CFU for 1:1, 1:2, 1:3, and 1:4, respectively), likely as a consequence of membrane ergosterol solubilization. SEM images demonstrated that cell membrane damage is a visible and significant mechanism that contributes to the antimicrobial effects of Cx:β-cd complexes. Cell disorganization increased significantly as the proportion of β-cyclodextrin present in the complex increased. Morphology of cells exposed to complexes with 1:3 and 1:4 molar ratios of Cx:β-cd were observed to have large aggregates mixed with yeast remains, representing more membrane disruption than that observed in cells treated with Cx alone. In conclusion, nanoaggregates of Cx:β-cd complexes block yeast growth via ergosterol extraction, permeabilizing the membrane by creating cluster-like structures within the cell membrane, possibly due to high amounts of hydrogen bonding.

Candida sp in the oral cavity with and without lesions: maximal inhibitory dilution of propolis and periogard

Fifty individuals of both sexes aged on average 45.2 years were evaluated at the Semiology Clinic of FORP-USP in order to isolate and identify yeasts from the oral cavity, with and without lesions, and to determine the maximal inhibitory dilution (MID) of the commercial products Propolis (Apis-Flora) and Periogard (Colgate) against the strains isolated. Yeasts of the genus "Candida" were detected in the saliva of 9.19 (47.4(per cent)) individuals with clinically healthy mouth, 18/22 (81.8(per cent)) of individuals with oral lesions, and in 4/9 (44.4(per cent)) of patients with deviation from normality, and were detected in 19/22 (86.4(per cent)) of the lesions. In the group with oral candidiasis, we isolated in tongue and lesion, respectively for each specie: "C. tropicalis" (8(per cent) and 10.7(per cent)), "C. glabrata" (4(per cent)) and 3.6(per cent)) and "C. parapsilosis" (2(per cent) and 3.6(per cent)), in addition to "C. albicans" (71.4(per cent) and 67.8(per cent)) as the only species and the prevalent. The total cfu counts/ml saliva showed a higher mean value in the group with oral candidiasis (171.5E+3) than in the control group (72.6E+3) or the group with abnormalities (8.3E+3). Most of the test strains 67/70 (95.71(per cent)) were sensitive to the antiseptics, with Propolis presenting a MID of 1:20 for 54/70/77.1(per cent)), and Periogard a MID of 1:160 for 42/70 (60(per cent)) strains from healthy sites, results similar to those obtained with strains from oral lesions. Different results were mainly observed among different species. The results indicate the possibility of using the antiseptics Propolis and Periogard (chlorhexidine) for the prevention and treatment of oral candidiasis

Biocompatibilidade das soluçöes de iodo polivinilpirrolidona (PVP-1) e de clorexidina: estudo histológico em ratos / Biocompatibility study of 1-PVP and chlorhexidine solutions: histological study on rats

O objetivo deste trabalho foi analisar a reaçäo do tecido conjuntivo subcutâneo em contato com tubos de polietileno preenchidos com soluçäo de iodo polivinilpirrolidona tópico (PVP-1) a 1 por cento e clorexidina a 0,2 por cento e soro fisiológico no seu interior. Os animais foram sacrificados aos 3, 5, 10, 30 e 60 dias pós-operatórios. Os resultados obtidos permitiram concluir que: os grupos apresentaram diferenças estatisticamente significantes entre si, podendo ser ordenados, do que apresentou melhor para o que apresentou pior biocompatibilidade: 1. Grupo soro fisiológico/ 2. Grupo Clorexidina/ 3. Grupo PVP-1

Influência de bochechos com soluçöes de digluconato de clorexidina a 0,2 por cento, fluoreto de sódio a 0,05 por cento pH 3,4 e esteviosídeo a 0,1 por cento, na inibiçäo da placa dentária "in vivo", em crianças / Influence of the mouthrinses with 0,2 percent chlorhexidine digluconate, 0,05 percent sodium fluoride pH 3,4 and 0,1 by cent stevioside, in the inhibition of dental plaque \"in vivo\", in children

Foi avaliado o efeito de bochechos diários com digluconato de clorexidina a 0,2 por cento, fluoreto de sódio a 0,05 por cento pH 3,4 e esteviosídeo a 0,1 por cento, sobre a inibiçäo do acúmulo de placa dentária em crianças e verificado os efeitos colaterais das soluçöes, assim como a aceitaçäo das mesmas. Para tanto, 200 crianças entre 7 e 11 anos de idade foram divididas em 4 grupos, sendo um controle (água deionizada) e 3 experimentais, utilizando-se para avaliaçäo clínica o índice de placa LOE. As crianças executaram bochechos diários com 5 ml de soluçäo por 1 minuto, sob supervisäo, durante um período de 6 semanas. Concluiu-se que todas as substâncias testadas apresentaram inibiçäo de placa bacteriana, com reduçäo de 52,63 por cento para o digluconato de clorexidina a 0,2 por cento, 39,34 por cento para o fluoreto de sódio a 0,05 por cento pH 3,4 e 30,60 por cento para o esteviosídeo a 0,1 por cento. Todas as soluçöes experimentais foi mais relatado para o digluconato de clorexidina a 0,2 por cento e a pigmentaçäo dentária observada apenas com a utilizaçäo dessa substância

Actividad in vitro de la clorhexidina frente a cepas de acinetobacter baumannii / In vitro activity of chlorhexidine against strains of acinetobacter baumannii

Se evaluó la actividad inhibitoria del crecimiento y actividad bactericida in vitro del gluconato de clorhexidina frente a 62 cepas de Acinetobacter baumannii multirresistente a los antibióticos. Concentraciones de la droga entre 0,4 y 40 *g/ml inhibieron el crecimiento de la totalidad de las cepas. Las CIMs fueron 40 *g/ml para 40 (64,5%) cepas, 4 *g/ml para 21 (33,9%) de ellas y 0,4 *g/ml para 1 cepa (1,6%). Actividad bactericida de la clorhexidina fue obtenida a concentraciones entre 40 y 400 *g/ml y en la mayoría de las cepas dentro de los primeros 5 minutos de contacto con el antiséptico. Los resultados indican una eficiente actividad antimicrobiana in vitro de la clorhexidina frente a este microorganismo

Efeito da aplicaçäo tópica de agentes antimicrobianos sobre a inibiçäo da placa dentária "in vivo" em crianças e em ratos (Rattus novergicus, var-albinus) / Effect of topical application of antimicrobial agents on dental plaque inhibition \"in vivo\" in children and in rats (Rattus novergicus, var-albinus)

O presente trabalho avaliou através de 2 modelos de estudo, um em crianças outro em ratos, a capacidade dos mesmos demonstrarem as diferenças entre vários agentes antimicrobianos, quanto ao seu poder de inibir placa. As soluçöes utilizadas nos 2 estudos foram as mesmas: G.I - Água Deionizada (controle); G.II - Digluconato de Clorexidina (2 por cento); G.III - Fluoreto Estanoso (0,6 por cento); G.IV - C.C.P. (1,36 por cento); G.V - C.C.P. (1,36 por cento) com Sulfato de Cobre (1,0 por cento). No experimento com crianças, desenvolvido em 4 semanas as soluçöes foram aplicadas topicamente, 1 vez por semana, durante 1 minuto, sob isolamento relativo, na boca toda. Após cada aplicaçäo era solicitado à criança para näo comer ou beber por 30 minutos. A amostra constou de 144 crianças, entre 7 e 11 anos de idade, divididas em 5 grupos de estudo de acordo com o índice de placa de LOE 65, realizado no início da pesquisa. Elas receberam uma profilaxia profissional inicial, imediatamente antes da 1ª aplicaçäo tópica, e mantiveram seus hábitos de higiene bucal usuais, durante todo o período experimental. Ao final do estudo a placa foi novamente avaliada, pelo mesmo índice, por 2 examinadores calibrados que em seguida realizaram a profilaxia final. A análise dos dados obtidos permitiu concluir que: - Todos os tratamentos provocaram reduçöes do I.P.F. para a boca toda, em relaçäo ao I.P.I., sendo a reduçäo de placa maior para o G.II (clorexidina), seguida do G.V (C.C.P. mais sulfato de cobre), do G.IV (C.C.P.) e do G.III (fluoreto estanoso). A pequena reduçäo do I.P.F. observada no G.I, revelou que näo houve efeito placebo da escovaçäo; - Os resultados obtidos no G.II e G.V foram estatisticamente significantes, quando comparados ao G.III e G.IV, tanto para a boca toda como para a regiäo de molares. Entretanto, quando comparados o G.II com o G.V e, G.III com o G.IV näo houve significância estatística. Já para a regiäo dos incisivos, a significância estatística ocorreu somente entre os G.IV e G.V...